淋巴细胞培养基

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淋巴细胞培养基

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仅用于细胞增殖培养,不具备对细胞的选择、诱导、分化功能,培养后的细胞仅用于体外诊断。

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描述

【产品名称】

通用名称:淋巴细胞培养基

【包装规格】5mL/瓶,24瓶/盒

【预期用途】仅用于细胞增殖培养,不具备对细胞的选择、诱导、分化功能,

培养后的细胞仅用于体外诊断。

【检验原理】淋巴细胞培养基是专门开发用于外周血中淋巴细胞的增殖培养。淋巴细胞如需进行体外培养,需外界添加必要的生长条件,本公司生产的淋巴细胞培养基产品满足其进行体外生长的条件。

【主要组成成分】

组分名称含量比(%)
RPMI-1640培养基干粉1.04
碳酸氢钠0.2
植物源性人血白蛋白0.1
转铁蛋白0.0025
肝素钠300IU
PHA0.01

【储存条件及有效期】4-8℃保存, 有效期1个月;-20℃保存,有效期12个月。

【适用仪器】二氧化碳培养箱。

【样本要求】外周血约2ml。

【检验方法】

  1. 实验材料

淋巴细胞培养基(规格:5mL/瓶)

瑞氏染色液:称取100mg瑞氏染料置于研钵内,加入少量甲醇研磨至无颗粒,用甲醇配制成0.1%染色液。

40μg/mL秋水仙素

低渗液:0.075mol/L的KCl。

固定液:甲醇:冰醋酸=3:1。

姬姆萨母液:称取0.5g姬姆萨粉置于研钵内,量取33ml甘油,取少量加入研钵中与姬姆萨粉一起研磨至无颗粒,再将剩余的甘油倒入,搅拌后于37℃水浴保温2h后,再加入33ml甲醇,搅拌均匀后储存于棕色瓶中备用。

0.1mol/LpH7.4磷酸缓冲液。

  1. 操作方法和步骤

2.1 转化率观察细胞前处理

步骤:取淋巴细胞培养瓶一瓶,在无菌条件下用1mL注射器分别滴加20滴血细胞,轻轻摇匀,放入37℃二氧化碳培养箱中放置72h。用移液枪将细胞培养液移入10ml离心管,离心(1000rpm、5min),弃去上清,滴一滴细胞悬液于玻片上,推片。待片干后用瑞氏染色液染色,细胞呈天蓝色。油镜下计数200个单核细胞(包括转化与未转化的细胞)。

转化与未转化细胞的判断:

未转化的细胞:体积小,细胞直径6-8μm,细胞核不增大,染色质浓,无核仁,胞浆极少。

转化的细胞:体积大,细胞直径12-25μm,细胞核增大,胞浆丰富。

按下式计算转化率:

细胞转化率(%)=  转化型细胞数   ×100%

细胞总数

2.2 染色体观察细胞前处理

2.2.1 取细胞培养基2瓶,在无菌条件下用2ml注射器滴加25滴血细胞,轻轻摇匀,放入37℃二氧化碳培养箱中培养68-69h。

2.2.2 秋水仙素处理:68-69h后,在无菌条件下,用1ml注射器向细胞培养基瓶内滴加秋水仙素,使终浓度为0.4μg/ml,放置3-4h,使总时间为72h。

2.2.3 细胞分离和固定:取出细胞瓶,用移液枪将细胞培养基移入10ml离心管,离心(1500rpm、7min)。用移液枪吸弃上清液,加入8ml 0.075mol/L KCl低渗液,轻轻吸匀,置37℃水浴25min。然后加入2ml固定液,混匀,预固定15min,然后离心(1500rpm、7min)。用移液枪吸弃上清液,加8ml固定液,轻轻吸匀,静置15min,然后离心(1500rpm、7min)。小心吸弃上清液,加8ml固定液,轻轻吸匀,静置固定15min或过夜。

2.2.4 制备悬液:离心(1500rpm、7min),用滴管小心吸弃上清液,视细胞的多少余留少许上清液。

2.2.5 滴片:用吸管将细胞混匀,吸取细胞悬液自10-20cm高滴在一干净并预先经冰块冷却的玻片上,轻轻吹散,在酒精灯火焰上方缓慢烘干或室温下自然晾干。

2.2.6染色:将姬姆萨母液用0.1mol/L pH7.4磷酸缓冲液以1:10稀释,过滤得染色液;在玻片上滴加数滴染色液,染色5-10min,用0.1mol/L pH7.4磷酸缓冲液漂洗、除去多余的染色液,晾干。油镜下观察。结果:以细胞形态好,分裂细胞核形大,染色体分散而且清晰为好。

【阳性判断值或参考区间】细胞形态好,分裂细胞多,细胞核型大,染色体清晰。

【检验结果的解释】由于个体之间差异,淋巴细胞生长速度有快慢,用户需要自行调整培养时间。

【检验方法的局限性】本产品要求细胞培养条件为37℃,5% CO2,饱和湿度条

件下培养。

【产品性能指标】

pH                       7.0±0.5

渗透压                   280-340 mOsmol/kg

内毒素                   ≤0.5 EU/mL

无菌                     薄膜过滤法接种培养14天后培养基澄清

外观                     淡红色澄清水溶液

装量                     5mL±0.3mL

【注意事项】

  1.  本品仅用于体外诊断,不用于治疗。
  2.  严禁使用过期产品。
  3.  -20℃保存,有效期2年。避免微生物污染。
  4.  培养基从冰箱中取出,需恢复到室温,并摇匀后再使用。
  5.  本品无对人体有害物质,接触皮肤清水清洗即可,如进入人眼,需用大量清水冲洗,如果仍有不适需及时就医。
  6.  产品使用后按医疗废物处理。
  7.  本产品要求细胞培养条件为37℃,5% CO2,饱和湿度条件下培养,否则会影响质量。

1 候艳香. 人外周血淋巴细胞培养染色体制备及影响因素. 检验医学与临床. 2013, 10(7):874-875.

2 黄江玲, 林祥伟, 邱少雄, 陈乐川, 刘兴进. 人外周血淋巴细胞培养及染色体制备的方法及成功率. 中国校医. 2015: 29(7): 526-527.

3 鄂征. 组织培养. 北京:北京出版社. 1995.

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