羊水细胞培养基

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羊水细胞培养基

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仅用于细胞增殖培养,不具备对细胞的选择、诱导、分化功能,培养后的细胞仅用于体外诊断。

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描述

【产品名称】

通用名称:羊水细胞培养基

【包装规格】100mL/瓶

【预期用途】仅用于细胞增殖培养,不具备对细胞的选择、诱导、分化功能,

培养后的细胞仅用于体外诊断。

【检验原理】羊水细胞培养基是专门开发用于人羊水细胞的体外产前诊断。羊水细胞如需进行体外培养,需外界添加必要的生长条件,本公司生产的羊水细胞培养基产品满足其进行体外生长的条件。

【主要组成成分】

组分名称含量比(%)
RPMI-1640培养基干粉1.04
碳酸氢钠0.2
植物源性人血白蛋白0.1
转铁蛋白0.0025
庆大霉素0.0025
两性霉素0.00025

【储存条件及有效期】-20℃保存,有效期24个月。

【适用仪器】显微镜、二氧化碳培养箱。

【样本要求】无菌抽取羊水约15-30ml。

【检验方法】

  1. 检验材料

羊水细胞培养基

40 μg/ml 秋水仙碱

低渗液:0.075mol/L的KCl

固定液:甲醇:冰醋酸=3:1

姬姆萨母液:称取0.5g姬姆萨粉在研钵内。量取33ml甘油,取少量加入研钵中与姬姆萨粉一起研磨至无颗粒为止,再将剩余的甘油倒入,搅拌后于37℃水浴保温2 h,再加入33ml甲醇。搅拌均匀后储存于棕色瓶中备用。

0.1mol/L pH 7.4磷酸缓冲液

  1. 检验步骤

2.1 采样:在无菌条件下经腹壁行羊膜穿刺术抽取羊水。弃去最初抽出的2ml,更换针筒后再继续抽取15-30ml,留2ml用于活细胞和血细胞计数,其余立即注入无菌离心管中。

2.2 收集:离心分离细胞,1000 rpm(约250g)离心10min。

2.3 在无菌操作台上吸弃上清液,每管约留0.5-1ml,吸管打散细胞。制成细胞悬液,再加4.0-4.5ml培养液入管内,吸管轻混匀,移至25cm2一次性培养瓶中。

2.4 培养:培养瓶置于5%CO2、湿度饱和的37℃培养箱中,开放式培养。一般5天后镜下观察,可见成纤维样或上皮细胞生长,当细胞生长旺盛,在贴壁细胞层的背景上出现圆形细胞时,可视情况换液,24-48 h后,若细胞生长状况良好,即可终止培养。

2.5 终止培养:在收获前4h,加秋水仙碱使终浓度为0.5-1μg/ml。

2.6 细胞收获:弃培养液,用PBS洗涤,加0.025%的胰蛋白酶0.5-1ml/瓶,消化5-10min。用吸管移细胞悬液于离心管中,1000-2000 rpm离心10min,弃上清,留细胞沉淀。

2.7 预固定:加入5ml 0.075mol/L KCl低渗液,轻轻吸匀,置37℃水浴20min。再加入2ml固定液,混匀,预固定10min,1000rpm离心7min。

2.8 固定:弃上清液,加5ml固定液,轻轻吸匀后静置30min,1000rpm离心7min。弃上清液,加5ml固定液,轻轻吸匀,静置固定20min(也可静置过夜)。

2.9 制备悬液:弃上清液,1000rpm离心7min,用滴管小心吸弃上清液,视细胞的多少余留少许上清液。

2.10 滴片:用吸管将细胞混匀,吸取自然悬液自10-20cm高滴在一干净、经冰上预冷的玻片上,轻轻吹散,在酒精灯下烘干或室温自然晾干。

2.11 染色:将姬姆萨染液用0.1mol/LpH7.4磷酸盐缓冲液以1:10比例稀释,过滤;在玻片上滴加数滴染色液、染色5-10min,用0.1mol/LpH7.4磷酸盐缓冲液漂洗,除去多余的染液,晾干。油镜下观察,一般以细胞形态好,分裂细胞核型大,染色体分散而且带型清晰为好。

2.12 取上述制备好的正常人体细胞染色体标本进行正常人体细胞染色体标本的观察和计数,先在低倍镜下观察到细胞分裂中期染色体分裂相,寻找分散良好,着色较佳的分裂相,移到视野中央,换高倍镜观察,然后用油镜观察,分析人类染色体形态并计数。

【阳性判断值或参考区间】每张玻片可分析染色体核型≥10个。

【检验结果的解释】细胞培养时间、加入秋水仙碱的量、以及低渗操作时间对结果影响较大。

【检验方法的局限性】本产品仅用于羊水细胞培养,要求细胞培养条件为37℃,5% CO2,饱和湿度条件下培养。

【产品性能指标】

pH                       7.0±0.5

渗透压                   280-340 mOsmol/kg

内毒素                   ≤0.5 EU/mL

无菌                     薄膜过滤法接种培养14天后培养基澄清

外观                     淡红色澄清水溶液

装量                     100mL±3mL

【注意事项】

  1.  本品仅用于体外诊断,不用于治疗。
  2.  严禁使用过期产品。
  3.  -20℃保存,有效期2年。避免微生物污染。
  4.  培养基从冰箱中取出,需恢复到室温,并摇匀后再使用。
  5.  本品无对人体有害物质,接触皮肤清水清洗即可,如进入人眼,需用大量清水冲洗,如果仍有不适需及时就医。
  6.  产品使用后按医疗废物处理。
  7.  本产品要求细胞培养条件为37℃,5% CO2,饱和湿度条件下培养,否则会影响质量。

1 杨灿峰, 陈道桢, 耿金花, 王俊峰. 中孕羊水细胞培养和染色体制备方法的分析. 中国优生与遗传杂志. 2011, 19, 3:(55-59).

2 张赫. 羊水细胞培养在产前诊断中的应用价值. 中外医疗.2016: 13(59-60).

3 鄂征. 组织培养. 北京:北京出版社. 1995.

4 孙明强, 徐继秀, 孙立宁, 刘爱玲. 提高羊水细胞培养成功率的方法. 中国优生与遗传杂志. 2007, 15, 6: (45-46).

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