骨髓细胞培养基

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骨髓细胞培养基

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仅用于细胞增殖培养,不具备对细胞的选择、诱导、分化功能,培养后的细胞仅用于体外诊断。

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描述

【产品名称】

通用名称:骨髓细胞培养基

【包装规格】5mL/瓶,24瓶/盒;100mL/瓶。

【预期用途】仅用于细胞增殖培养,不具备对细胞的选择、诱导、分化功能,

培养后的细胞仅用于体外诊断。

【检验原理】骨髓细胞培养基是专门开发用于骨髓细胞的增殖培养。骨髓细胞如需进行体外培养,需外界添加必要的生长条件,本公司生产的骨髓细胞培养基产品满足其进行体外生长的条件。

【主要组成成分】

组分名称含量比(%)
RPMI-1640培养基干粉1.04
碳酸氢钠0.2
植物源性人血白蛋白0.1
转铁蛋白0.0025
肝素钠300IU
庆大霉素0.0025
两性霉素0.00025

【储存条件及有效期】4-8℃保存, 有效期1个月;-20℃保存,有效期12个月。

【适用仪器】二氧化碳培养箱。

【样本要求】骨髓约3-5ml。

【检验方法】

  1. 标本接种

1.1 采集标本

无菌抽取3-5ml骨髓,注入肝素钠抗凝管,使抗凝剂与标本充分混匀,防止凝固。

1.2 标本处理

在无菌操作台里,取2ml骨髓入无菌离心管中,加入RPMI-1640液5ml洗脱。

1500rpm离心10min,去上清。再加入RPMI-1640液5ml,混匀。

重复洗脱共三次,最后一次去上清,加入RPMI-1640液至洗脱前体积,混匀。

1.3 接种

用注射器抽取离心管中的细胞液,参考患者白细胞计数量按梯度用7号针头垂直滴细胞液至骨髓细胞培养基内(约为8滴、12滴、15滴)。

  1. 培养

置37℃±0.5℃恒温箱中培养约48h(可在中间时段轻摇一次,使细胞获得充分营养)。

  1. 细胞学处理

3.1 培养完成前45min,加入秋水仙素(20μg/ml)至终浓度为0.2-0.8μg/ml,继续培养45min。

3.2 将细胞液吸入10ml离心管中,1500rpm离心10min。去上清,留约0.5ml细胞液。

3.3 低渗:加入0.075mol/L KCl 8ml,用吸管吹打约30次,37℃水浴30min。

3.4 预固定:加入1.5ml左右的固定剂(甲醇∶冰醋酸=3∶1),轻混匀。37℃水浴10min。1500rpm,离心10min,去上清,约留0.5ml上清液。

3.5 固定:加入8ml左右的固定剂,轻混匀。1500rpm,离心10min后去上清,约留0.5ml上清液。

3.6 重复固定:加入8ml左右的固定剂,轻混匀,1500rpm,离心10min,去上清,约留0.5ml上清液。去上清液时,视管底细胞量加入适当固定液,轻轻混匀制成细胞悬液。

3.7 滴片:将细胞悬液滴于用冰水预冷的载玻片上,高度约为30cm左右,每张载玻片上滴2滴。

3.8 放入75℃烤箱中烤片3h。

  1. 染色体显带

将经烤片处理的玻片放入37℃的0.25%胰酶溶液中(pH=7.2-7.4)消化1-1.5min(根据显带效果调整胰酶作用时间)再用0.85%NaCl溶液(预温至37℃)漂洗两次,在预温至37℃的姬姆萨溶液中染色,自来水冲洗干净,晾干后,即可阅片。

【阳性判断值或参考区间】细胞形态好,分裂细胞多,细胞核型大,染色体清晰。

【检验结果的解释】由于个体之间差异,骨髓细胞生长速度有快慢,用户需要自行调整培养时间。

【检验方法的局限性】本产品要求细胞培养条件为37℃,5% CO2,饱和湿度条

件下培养。

【产品性能指标】

pH                       7.0±0.5

渗透压                   280-340 mOsmol/kg

内毒素                   ≤0.5 EU/mL

无菌                     薄膜过滤法接种培养14天后培养基澄清

外观                     淡红色澄清水溶液

装量                     5mL±0.3mL

【注意事项】

  1.  本品仅用于体外诊断,不用于治疗。
  2.  严禁使用过期产品。
  3.  -20℃避光保存,有效期2年。避免微生物污染。
  4.  培养基从冰箱中取出,需恢复到室温,并摇匀后再使用。
  5.  本品无对人体有害物质,接触皮肤清水清洗即可,如进入人眼,需用大量清水冲洗,如果仍有不适需及时就医。
  6.  产品使用后按医疗废物处理。
  7.  本产品要求细胞培养条件为37℃,5% CO2,饱和湿度条件下培养,否则会影响质量。

1 张玮玮, 胡成进. 血液病骨髓染色体制备的影响因素. 实用医药杂志. 2012, 29(04):369-371.

2 秦传芳, 房俊文.培养血液和骨髓研究染色体方法的革新. 新疆医学院学报. 1978: 1(7-9).

3 鄂征. 组织培养. 北京:北京出版社. 1995.

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