Super Atlas ECL (特超敏/ 稳定化学发光检测试剂盒)

Super Atlas ECL (特超敏/ 稳定化学发光检测试剂盒)

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Super Atlas ECL 最高灵敏度底物是一款具有超高灵敏度的增强型化学发光(ECL)底物,可通过辣根过氧化物酶(HRP)实现低飞克级(fg)的免疫印迹检测。Super Atlas ECL具有更强的稳定性,用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶 HRP 的抗体及其关联的抗原。由于采用了独特的发光底物系统,Super Atlas ECL 超敏发光液是目前最灵敏的商业化荧光 ECL 检测试剂。

SKU: S-6028(100 mL) 分类:
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描述

产品名称:Super Atlas ECL ( 特 超 敏/ 稳定 化学发光检测试剂盒)
产品货号:S-6028(100 mL)
产品内容及规格:100mL(A 液 50 mL+ B 液 50 mL )
储存 条件
4℃密封避光保存一年以上,短期可放置室温。
产品描述
Super Atlas ECL 最高灵敏度底物是一款具有超高灵敏度的增强型化学发光(ECL)底物,可通过辣根过氧化物酶(HRP)实现低飞克级(fg)的免疫印迹检测。Super Atlas ECL具有更强的稳定性,用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶 HRP 的抗体及其关联的抗原。由于采用了独特的发光底物系统,Super Atlas ECL 超敏发光液是目前最灵敏的商业化荧光 ECL 检测试剂。
Super Atlas ECL 特点:
1. 具有极高灵敏度和高信噪比,使用适当的一抗和二抗时,可在硝化纤维膜或 PVDF 膜上检测丰度为低飞克(中zeptomole(10^21))级的蛋白条带;
2. 长信号持续时间:优化条件下,可检测的光信号输出长达 8-12 小时;
3. 明亮信号—通过胶片或成像系统进行曝光,易于捕获图像;
4. 价格经济:配方经过优化,可适用于浓度极低的抗体检测
• 1 ng-0.2 μg/mL一抗(或1 mg/mL的稀释1: 5,000-1: 100,000)
• 2 ng-10 ng/mL 二抗(或 1 mg/mL 的稀释 1: 100,000-1:500,000)
使用方法
1. 执行常规 SDS-PAGE、转膜和 Western Blot 步骤,0.01-0.2μg/mL 一抗孵育 1 h 或过夜,洗膜后,2-10 ng/mL 二抗孵育30-60 min。
2. Western Blot 最后一次洗膜的同时新鲜配制发光工作液:分别取等体积的溶液 A 和 B,放入干净容器中混合。
注:建议立即使用工作液,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
3. 用镊子取出膜,搭在滤纸上沥干洗液但勿使膜完全干燥。将膜完全浸入发光工作液(0.1 mL 发光工作液/cm 膜)中,与发光工作液充分接触。室温孵育 3-5 min。
4. 取膜,弃发光工作液,用吸水纸略吸去过多的液体。将膜放在两片保鲜膜中间,随后进行压片检测或成像仪检测。
5. 压片检测:将膜固定于片夹内,蛋白带面向上。暗室内压片 1 min,立即显影定影,根据结果再调整压片时间。或直接分别压片 30 s、1、3、5 min,然后一起显影定影观察结果。
6. 成像仪检测:将膜放置到成像仪内,参考仪器说明书进行检测。
注意事项
1. 步骤 1~4 可在日光灯下操作,但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。
2. 长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系,曝光不足则条带模糊。
3. 发光工作液孵育约 3 min 后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使 X 光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使 X 光胶片感光,因而弱带可曝光 1-10 h。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用 ECL 发光和曝光。
4. 由于特超敏发光液极其灵敏,强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗 1:1000~1:4000,二抗 1:2000~1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败。
5. 某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。
6. 使用肉眼可见的预染色蛋白 Marker 和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。
7. NaN 3 能抑制HRP 活性,回收第二抗体应避免使用NaN 3 ,如必需使用勿超过 0.01%。

问题可能的原因解决方案
反向图像(即白色条带黑色背景)体系中过多的 HRP进一步稀释 HRP 结合物
膜上有棕色或黄色条带体系中过多的 HRP进一步稀释 HRP 结合物
在暗室污点发光体系中过多的 HRP进一步稀释 HRP 结合物
信号持续时间少于 8 h体系中过多的 HRP进一步稀释 HRP 结合物
信号微弱或没有体系中太多的 HRP 耗尽底物,导致信号很快消退进一步稀释 HRP 结合物
信号微弱或没有抗原或抗体量不足增加抗原或抗体含量
信号微弱或没有蛋白转膜效率过低优化转膜
高背景体系中过多的 HRP进一步稀释 HRP 结合物
高背景封闭不够优化封闭条件
高背景封闭液不合适尝试换另一种封闭液
高背景洗膜不够增加洗膜的时间、次数或洗膜液体积
高背景过度曝光降低曝光时间
高背景抗原或抗体浓度过高降低抗原或抗体浓度
蛋白条带内有斑点蛋白转膜效率过低优化转膜程序
蛋白条带内有斑点水化膜不均正确执行制造商的推荐水化膜过程
蛋白条带内有斑点膜和膜之间存在气泡曝光前去除气泡