Super GelGreen ® ，10,000×

描述

产品货号：S2003
产品规格：0.5 mL
Super GelGreen ® 是一种高灵敏、无毒超安全和超稳定的荧光核酸凝胶染色试剂（在工作浓度中）。它可替代溴化乙锭 (EtBr，EB），具 有远高于 EB 的灵敏度，同时不需要脱色。此外，它可以满足使用 254 nm 或 488 nm 激光凝胶扫描仪，或者可见光激发的 Dark Reader 的研究人员的使用要求。
使用方法
1 ．胶染法（用法同 EB ）
（1）制胶时加入 Super GelGreen ® 核酸染料
（例如：每 50 mL 琼脂糖溶液中加入 5 μL SuperGelGreen ® 10,000× 储液，以此比例类推）。
（ 2）按照常规方法进行电泳。
注意事项：
此方法染色染料用量相对较少，500 μL 染料大约可以做 100 块 50 mL 的胶。
由于 Super GelGreen ® 具有良好的热稳定性，可以在热的琼脂糖溶液中直接添加，而不需要等待溶液冷却。摇晃，振荡或者翻转以保证染料充分混匀。也可以选择将 Super GelGreen ® 储液加到琼脂糖粉末和电泳缓冲液中，然后用微波炉或其他常用方式加热以制备琼脂糖凝胶。Super GelGreen ® 兼容所有常用的电泳缓冲溶液。
含有染料的预制凝胶溶液可以大量制备，并长期保存直到使用。
此方法不适合预制聚丙烯酰胺凝胶，对于聚丙烯酰胺
2 ．泡染法
（1）按照常规方法进行电泳。
（2）用 H 2 O 将 Super GelGreen ® 10,000× 储液稀释约 3,300倍到 0.1 M NaCl 中，制成 3× 染色液。（例如将 15 μL Super GelGreen ® 10,000× 储液和 5 mL 1 M NaCl 加到 45 mL H 2 O中）。
（3）将凝胶小心地放入合适的容器中，如聚丙烯容器中，缓慢加入足量的 3× 染色液浸没凝胶，室温振荡染色 30 min左右，最佳染色时间根据凝胶厚度以及琼脂糖浓度不同而略有不同。对于含 3.5～10％丙烯酰胺的凝胶，染色时间通常介于 30 min 到 1 h，并随丙烯酰胺含量增加而延长。
注意事项：
用泡染法染色时，染料用量较多，单次使用的染色液可重复使用 3 次左右。
3× Super GelGreen ® 染色液可以大量制备，在室温下避光保存直至用完。
注：1、如果总是看到条带弥散或分离不理想，建议使用泡染法染色以确认问题是否与染料有关。
2、如果染色后问题依旧存在，则说明问题与染料无关，请尝试：降低琼脂糖浓度、选用更长的凝胶、延长凝胶时间以保证边缘清晰、改进上样技巧或选择泡染法染色。
注意：Super GelGreen ® 需要避光操作！

一、实验目的
核酸的琼脂糖凝胶电泳实验，对核酸（DNA 或 RNA）进行分离、鉴定和纯化等分析。
二、主要试剂
1. 琼脂糖（如 Invitrogen 产品）
2. 1×TBE 电泳缓冲液
3. 0.1 M 的 NaCl 水溶液
4. DNA Marker：如 Promega 1kb DNA ladder (G571A)
5. 10000× Super GelGreen ® in water/DMSO（本公司产品）
三、实验方案
1. 根椐制胶量及凝胶浓度，准确称量琼脂糖粉（如 1%，即1 g 琼脂糖加入 100 mL 1× TBE）。
2. 加入一定量的 1× TBE 电泳缓冲液（总液体量不宜超过锥形瓶的 50%容量）
注：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须统一。
3. 锥形瓶在微波炉中加热，熔化琼脂糖。此操作重复数次，直至琼脂糖完全熔化。
4.
1) 胶染法（用法同 EB）：琼脂糖溶液加入 10000× SuperGelGreen ® 核酸染料。每 50 mL 胶中加入 5 μL Super GelGreen ® 核酸染料，并充分混匀。（由于 Super GelGreen ®具有出色的热稳定性，可将试剂直接加入高温的凝胶溶液中，而不用等凝胶溶液冷却后再加入。也可以采用将 Super GelGreen ® 试剂事先与凝胶粉末混合，加热制成）。
2) 泡染法（与胶染法 2 选 1）：将琼脂糖溶液倒入制胶模中，然后在适当位置处插上梳子，在室温下使胶凝固（大约30 min~1 h）。
5. 将做好的凝胶放置于电泳槽中，上样。
6. 电泳： 1× TBE 的电泳缓冲液中，100 V 电泳 45-90 min（时间视情况而定）。
7.
1) 胶染法：直接图像采集，通过标准的透视器（254 nm）或 488 nm 激光凝胶扫描仪，或者可见光激发，观察染色凝胶，拍照、保存。
2) 泡染法：用 0.1 M 的 NaCl 水溶液按照 3300﹕1 的比例稀释 Super GelGreen ® 浓缩液，混匀，制成 3× Super GelGreen ®染色溶液，将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中，放入凝胶，缓慢加入足量的 3× 染色溶液浸没凝胶，室温轻轻振荡染色30 min 左右，染色时间因凝胶浓度和厚度而定。
图像采集：通过标准的透视器（254 nm）或 488 nm 激光凝胶扫描仪，或者可见光激发，观察染色凝胶，拍照、保存。（染色溶液至少可重复使用2-3次。如果不是立即再用的话，建议将用过的染色溶液冷藏保存。）

1. 鉴于 Super GelGreen ® 的高灵敏性，建议减少 DNA 的上样量，推荐已知浓度样品的上样量为 50-200 ng/泳道。对于未知浓度的样品，尝试 1/2 或 1/3 的常用上样量。
2. 推荐用 1×TBE 缓冲液代替 TAE，因为含硼酸盐的试剂导电性能更好。
3. 电泳时电压不宜过高，一般 TBE 不要超过 120 V，TAE不要超过 100 V。
4. 染料无需低温冷藏，请于室温下储存，以避免沉淀，若发现沉淀，请将染料加热至 45-50℃，2 min，搅拌溶解，不影响使用效果。