X-Green II dsDNA Quantitation Kit

描述

产品名称: X-Green II dsDNA Quantitation Kit
产品货号: X2033
产品规格: 2000T
检测仪器：与大多数荧光酶标仪、荧光计兼容
产品内容

储存条件
本产品 4℃避光保存，推荐条件下至少可以储存 6 个月。对于长期储存，20× Buffer 和 dsDNA 标准液可以储存在≤-20ºC。
产品参数
Ex/Em: 480/520 nm（结合 dsDNA）
产品介绍
X-Green II是荧光检测dsDNA并进行定量的一种产品，这种方法非常灵敏。常用于分子生物学技术：cDNA 文库的构建、亚克隆的DNA片段纯化及应用，比如进行DNA定量、产物扩增和引物的进一步检测。常规的DNA含量的检测方法是在260nm处测其吸光值。这种方法的主要缺点是核苷酸、单链核酸和蛋白质对信号的影响很大，并且还会受到核酸制备过程中污染物的干扰，无法区分DNA和RNA，而且这种方法不灵敏（5 μg/mL dsDNA溶液A 260 =0.1）。X-GreenII定量检测方法简单、方便，成为生物制品残留DNA检测的标准。
X-Green II只有与dsDNA结合后才发出荧光，并且所发荧光强度与DNA浓度成正比。X-Green II dsDNAQuantitstion Kit可以检测出25pg/mL – 1000ng/mL范围内的dsDNA，且线性关系较好(R 2 >0.99)。
实验步骤
试剂制备
X-Green II dsDNA定量试剂是以1 mL的浓缩液形式保存在有机溶剂中。实验时，配制操作溶液：2× X-Green II试剂，将组分A用1×Buffer（组分B稀释20倍）按1:200的比例稀释。对于终体积为2 mL的检测体系，如果要准备足够的操作溶液测定20个样品，可在20 mL 1×Buffer中加入100μL 组分A；对于终体积为200 μL的检测体系，如果要准备足够的操作溶液测定20个样品，可在2 mL 1× Buffer中加入10 μL组分B。由于试剂容易吸附到玻璃表面，要在塑料容器中配制。组分A试剂见光易降解，因此要注意避光保存。溶液最好在配制好的数小时内使用，以保证最佳的实验结果。

实验方法
1. 将试剂盒中提供的组分 B 储备液稀释成 1× Buffer，如制备 50 mL 1× Buffer，需要将 2.5 mL 组分 B 加入到 47.5mL无菌水中。
2. 稀释 DNA 标准品，制作标准曲线。用 1× Buffer 稀释组分 C 100 μg/ mL 至 2 μg/ mL。 如取 40μL 组分 C，加入1.96mL 无菌水即可。对于低浓度的标准曲线，可以把 2μg/mL 的 DNA 标准品稀释 40 倍，制备 50ng/mL 的 DNA 储液，然后再进一步稀释。具体稀释方法可参照表 1、表 2。

表1. 宽线度标准曲线制备

表2. 低浓度标准曲线制备
3. 对于每个未知样品，将1-10 μL样品与99-90 μL 1× Buffer混合，混匀，加入微孔板孔中检测。
4. 用1× Buffer按照1：200稀释组分A，制备2× X-Green II工作液。对于每个标准品和每个未知样品，都需要100 μL的体积。确定要测试的样品和未知样品的总数，并将该数值乘以100 μL，即为所需稀释的X-Green II试剂的总体积。X-GreenII对光敏感，融化和稀释时要注意避光操作。
5. 添加100 μL稀释的X-Green II工作液到每个标准和样品孔。吹吸三次混匀。
6. 用锡箔纸覆盖微板，并在室温下孵育5 min。
7. 读取数据，取平均值生成标准曲线，并确定未知样品中DNA的浓度。

1. 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
2. X-Green II工作液最好现配现用，以保证最佳结果。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。